Los microscopios ópticos utilizan dos tipos básicos de objetivos: los objetivos secos y los objetivos de inmersión. Estos dos tipos de objetivos se diferencian en función del medio situado entre la muestra y la lente del objetivo. En el caso de los objetivos secos, no hay ningún medio entre la muestra y el objetivo aparte del aire. Los objetivos de inmersión, en cambio, están diseñados para observar la muestra a través de una capa de medio de inmersión que normalmente consiste en aceite. Esto significa que es necesario colocar la cantidad justa de aceite entre el cubreobjetos que protege la muestra y la lente del objetivo.
La ventaja principal de utilizar objetivos de inmersión es que la luz que llega al objetivo no necesita atravesar el aire. Esto se traduce en un aumento en la calidad de imagen ya que reduce la refracción de la luz incidente. En consecuencia, los objetivos de inmersión son utilizados en aplicaciones donde se requiere un gran poder de aumento y alta resolución.
Los objetivos secos tienen una apertura numérica baja. El máximo valor de apertura numérica que teóricamente puede alcanzar un objetivo seco es 1.0. Sin embargo, debido a limitaciones prácticas no es posible fabricar un objetivo seco con una apertura numérica superior a 0.95.
Con la ayuda de los aceites de inmersión es posible alcanzar una apertura numérica alrededor de 1.4. Esto supone una mejora sustancial en términos de resolución obtenida. Los máximos aumentos que alcanza el microscopio óptico se obtienen, por lo tanto, mediante objetivos de inmersión.
¿Cómo funciona el aceite de inmersión?
Los aceite de inmersión se usan para microscopia de alta resolución con objetivos de inmersión (por encima de 40 aumentos). Son producidos a partir de fuentes naturales o sintéticas, estos líquidos oleosos se aplican entre la superficie de la muestra y la lente del microscopio. Una característica esencial de los aceites de inmersión es que tienen un índice de refracción definido, que es casi idéntico al del vidrio. Esto permite una inmersión homogénea en aceite y elimina prácticamente la desviación del haz luminoso, aumentando así de manera significativa la eficacia de la lente.
¿Qué es la apertura númerica?
La apertura númerica es posiblemente el criterio más importante cuando se selecciona un objetivo. Conforme se incremente la apertura númerica a través de las series de objetivos del mismo aumento, la capacidad de colección de la luz y la resolución se incrementan. A diferencia del aire, el aceite de inmersión tiene un índice de refracción similar al del vidrio del cubre objetos. Al colocar aceite de inmersión entre el lente frontal del objetivo y el cubre objetos, el rango angular de los rayos difractados capturados por los lentes se incrementan y, en efecto, incrementa la apertura númerica del objetivo. Los rayos de luz que pasan a través del espécimen, cubre objetos y el aceite no se refractan conforme entran al lente pero solamente conforme estos dejan la parte de arriba de la superficie. Los objetivos que usan agua y/o glicerina como medio de imagen también están disponibles.
¿Cuáles son sus principales aplicaciones?
A través del uso de aceite de inmersión se obtiene una mayor resolución lo que habilita a los usuarios a enfocar objetos muy pequeños que no se podrian detallar usando objetivos secos. Por lo que son de gbran utilidad en el estudio de bacterias, células, protozoarios y aplicaciones de alta resolución.
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